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        蛋白質組學

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        「青蓮聚焦」精準藥物表征,助力新藥研發!生物藥表征系列六跑新學期

        2021-09-09 00:00:00


        01
        DSC測定

        差示掃描量熱法(DSC)是一種用于直接測定蛋白或其他生物分子在天然分子狀態下的熱穩定性的技術。該技術通過測量與分子恒速加熱時的熱量變化而實現對蛋白分子的熱穩定性進行表征。
         DSC用來做藥物與輔料的相互作用研究是很經典的應用。判斷是否有相互影響,主要是看藥物的特征吸熱或放熱峰是否消失或峰形,出現的溫度是否有改變,另外如果出現新的峰也可以認為是藥物與輔料有相互作用的證據。


        實驗儀器

        圖片

        Malvern VP-capillary DSC


        實驗原理及檢驗方法

        圖片
        蛋白分子在熱躍遷中點(Tm)值對應的溫度條件下,其折疊構象會發生突變,從而引起分子吸收或釋放熱量的變化。Tm值高,則代表較高的溫度條件才能引起蛋白分子的折疊構象變化,說明該蛋白分子越穩定。利用Malvern VP-capillary DSC,設定掃描溫度區間30℃100 °C,掃描速度為1°C/min,對一批參考品和三批次QC1中試生產成品和三批次QW的熱穩定性進行檢測,比較各個樣品間的檢測譜圖和Tm值。


        結果展示

        圖片

        1 QC1 DSC檢測譜圖


        1 DSC檢測結果


        樣品標準

        圖片

        樣品濃度及純度:總質量500μg以上,濃度1mg/ml以上,純度95%以上。



        02
        圓二色譜

        圓二色譜(Circular Dichroism)又稱CD光譜,是一種測量物質圓二色性的光譜技術,通過測量蛋白質等生物大分子的圓二色譜,從而得到生物大分子的二級結構,簡單、快速、廣泛的應用在蛋白質折疊、蛋白質構象研究和酶動力學等領域。

        技術原理

        圖片
        利用蛋白質的圓二色性及不對稱分子對左右圓偏振光吸收的不同來進行結構分析。蛋白質或多肽中主要的光活性基團是肽鍵、芳香氨基酸殘基及二硫鍵等,當平面圓偏振光的吸收不相同時,會產生吸收差值。由于這種吸收差的存在,造成了偏振光矢量的振幅差,圓偏振光變成了橢圓偏振光,即蛋白質的圓二色性。α-螺旋的譜是雙負峰形的,β-折疊是單負峰形的,無規卷曲在波長很短的地方出單峰。蛋白質的圓二色譜是它們所含各種立體結構組分的圓二色譜的代數加和曲線。因此用一波長范圍的圓二色譜可研究蛋白質中各種立體結構的含量。

        圓二色譜紫外區段(190-240nm),一般蛋白質的圓二色光譜分為兩段,波長范圍在185-245nm稱為遠紫外區,245-320nm稱為近紫外區。具有不同二級結構的蛋白質或者多肽所產生的CD譜帶的位置和吸收的強弱都不相同??梢岳貌煌瑓^域的CD光譜推算蛋白質分子中的α-螺旋、β-折疊、β轉角以及無規卷曲的含量。


        案例分享

        圖片

        1測試樣本圓二色譜圖


        測試樣本級結構比例表


        送樣標準

        圖片

        總質量500μg以上,濃度1mg/ml以上,純度95%以上。




        生物藥系列

        生物藥表征系列一

        高分辨質譜法(EMR)分子量檢測方法

        等電點

        生物藥表征系列二

        排阻色譜法純度測定

        SDS-PAGE

        CE-SDS

        生物藥表征系列三

        N/C端測序

        序列覆蓋度

        生物藥表征系列四

        肽指紋圖譜

        氨基酸組成

        生物藥表征系列五

        二硫鍵

        質譜法HCP覆蓋度

        標簽

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